Startpagina / Samenvattingen / chromatografie / ms-hplc-electrochemische

Vloeistofchromatografie - detecteren

Q: Welke detectoren worden vaak gebruikt bij GC en HPLC?

Bij GC (Gaschromatografie) : FID (Flame Ionisation Detector) MS (Massaspectrometrie) Bij HPLC (Vloeistofchromatografie) : UV/Vis (ultraviolet/zichtbaar licht) DAD (Diode Array Detector) RI (Refractie-indexdetector)

Q: Welke HPLC-detectoren zijn er en waar word er mee gemeten?

HPLC-detectoren: UV/Vis = Ultraviolet/Visible detector DAD = Diode Array Detector Fluor = Fluorescentie detector RI = Brekingsindex detector (Refractive Index) Electro = Electrochemische detector Cond = Geleidbaarheidsdetector (conductivity) MS = Massaspectrometer (quadrupool)

Q: Hoe werkt een UV/Vis-detector in HPLC en waar moet je op letten?

De UV/Vis-detector meet absorptie van UV-licht door analyten. Je meet bij één vaste of variabele golflengte (bv. 254 of 280 nm). De gevoeligheid hangt af van de molaire extinctiecoëfficiënt van de stof. Vooral stoffen met dubbele bindingen of aromaten absorberen goed boven 240 nm. Let op: ook de mobiele fase kan UV-licht absorberen, dus controleer de UV-cutoff : Hexaan: 195 nm Acetonitril: 190 nm Methanol: 205 nm Water: 190 nm Belangrijk : Je monitort maar één golflengte tegelijk bij UV/Vis (in tegenstelling tot DAD).

Q: Wat is een DAD-detector en wat is het voordeel ervan ten opzichte van een gewone UV/Vis-detector?

Een DAD-detector meet het gehele lichtspectrum van 190 tot 600 nm . Het signaal wordt opgevangen door een rij fotodiodes . Voor elke piek in het chromatogram kun je het UV/Vis-absorptiespectrum bekijken. Voordelen: Je kunt monstercomponenten identificeren op basis van hun absorptiespectrum. Je kunt zuiverheid controleren (bv. dubbele pieken onder een ogenschijnlijke enkele piek). In tegenstelling tot UV/Vis, meet DAD dus meerdere golflengtes tegelijk .

Q: Hoe werkt een RI-detector (brekingsindex) en wat zijn de nadelen?

Een RI-detector meet het verschil in brekingsindex tussen het eluaat en de mobiele fase. Werkt met twee cellen : Eén met alleen mobiele fase (referentie) Eén met eluaat (monster) Het licht passeert beide cellen, en het verschil in brekingsindex beïnvloedt de lichtstraal. Nadelen: Lage gevoeligheid Niet geschikt voor gradiënt-elutie Moet op constante temperatuur gehouden worden voor stabiele meting.

Q: Waar moet je op letten bij fluorescentiedetectie?

Let op quenching (onderdrukking van fluorescentie), bijv. door pigmenten.

Q: Waarom wordt een laserbeam soms gebruikt i.p.v. een xenonlamp?

Gevoeliger en specifieker dan een xenonlamp.

Q: Hoe wordt invloed van de mobiele fase op de meting gecorrigeerd?

Door gebruik van een dual flow cell , die ook de bijdrage van de mobiele fase meet en corrigeert.

24 belangrijke vragen over Vloeistofchromatografie - detecteren

Welke detectoren worden vaak gebruikt bij GC en HPLC?

Bij GC (Gaschromatografie):
- FID (Flame Ionisation Detector)
- MS (Massaspectrometrie)
Bij HPLC (Vloeistofchromatografie):
- UV/Vis (ultraviolet/zichtbaar licht)
- DAD (Diode Array Detector)
- RI (Refractie-indexdetector)

Welke HPLC-detectoren zijn er en waar word er mee gemeten?

HPLC-detectoren:

UV/Vis = Ultraviolet/Visible detector
DAD = Diode Array Detector
Fluor = Fluorescentie detector
RI = Brekingsindex detector (Refractive Index)
Electro = Electrochemische detector
Cond = Geleidbaarheidsdetector (conductivity)
MS = Massaspectrometer (quadrupool)

Bij welke detectoren mag er geen gradiënt elutie ingezet worden?

Bij RI, conductivity en electrochemische detectoren kan geen gradient elutie gebruikt worden

Hoe werkt een UV/Vis-detector in HPLC en waar moet je op letten?

De UV/Vis-detector meet absorptie van UV-licht door analyten.
Je meet bij één vaste of variabele golflengte (bv. 254 of 280 nm).
De gevoeligheid hangt af van de molaire extinctiecoëfficiënt van de stof.
Vooral stoffen met dubbele bindingen of aromaten absorberen goed boven 240 nm.
Let op: ook de mobiele fase kan UV-licht absorberen, dus controleer de UV-cutoff:
- Hexaan: 195 nm
- Acetonitril: 190 nm
- Methanol: 205 nm
- Water: 190 nm
Belangrijk: Je monitort maar één golflengte tegelijk bij UV/Vis (in tegenstelling tot DAD).

Wat is een DAD-detector en wat is het voordeel ervan ten opzichte van een gewone UV/Vis-detector?

Een DAD-detector meet het gehele lichtspectrum van 190 tot 600 nm.
Het signaal wordt opgevangen door een rij fotodiodes.
Voor elke piek in het chromatogram kun je het UV/Vis-absorptiespectrum bekijken.
Voordelen:
- Je kunt monstercomponenten identificeren op basis van hun absorptiespectrum.
- Je kunt zuiverheid controleren (bv. dubbele pieken onder een ogenschijnlijke enkele piek).
In tegenstelling tot UV/Vis, meet DAD dus meerdere golflengtes tegelijk.

Hoe werkt een RI-detector (brekingsindex) en wat zijn de nadelen?

Een RI-detector meet het verschil in brekingsindex tussen het eluaat en de mobiele fase.
Werkt met twee cellen:
- Eén met alleen mobiele fase (referentie)
- Eén met eluaat (monster)
Het licht passeert beide cellen, en het verschil in brekingsindex beïnvloedt de lichtstraal.

Nadelen:

Lage gevoeligheid
Niet geschikt voor gradiënt-elutie
Moet op constante temperatuur gehouden worden voor stabiele meting.

Wat is de functie van een fluorescentiedetector in HPLC?

Meet fluorescentie van monstercomponenten na excitatie door licht (xenonlamp of laser).

Wat is het voordeel van een fluorescentiedetector ten opzichte van UV/Vis?

veel gevoeliger

Waar moet je op letten bij fluorescentiedetectie?

Let op quenching (onderdrukking van fluorescentie), bijv. door pigmenten.

Waarom wordt een laserbeam soms gebruikt i.p.v. een xenonlamp?

Gevoeliger en specifieker dan een xenonlamp.

Hoe wordt invloed van de mobiele fase op de meting gecorrigeerd?

Door gebruik van een dual flow cell, die ook de bijdrage van de mobiele fase meet en corrigeert.

Welke stoffen geven van nature fluorescenti

Geconjugeerde koolstofverbindingen, zoals:

Aromatische organische moleculen (bv. PAK's)
Biomoleculen zoals vitamines en peptiden

Hoe kunnen niet-fluorescerende stoffen toch gedetecteerd worden met een fluorescentiedetector?

Door derivatisatie:

Binding van een fluorofoor aan de monstercomponent
Bijvoorbeeld: aminogroepen van aminozuren in een voorkolom koppelen aan een fluorescente stof

Wat is het nut van derivatisatie bij fluorescentiedetectie?

Het maakt niet-fluorescerende stoffen detecteerbaar via fluorescentie.

Wat meet een electrochemische detector?

Het verschil in stroom of stroomverbruik van de mobiele fase met monstercomponenten die uit de kolom komen. Deze componenten ondergaan een oxidatie- of reductiereactie.

Welke twee typen electrochemische detectie zijn er?

Amperometrisch en coulometrisch.

Welke elektrodes worden gebruikt in een electrochemische detector?

Referentie-elektrode (bijv. calomelelektrode)

Werkelektrode (zorgt voor oxidatie of reductie bij voldoende voltage)

Tegenelektrode (counter electrode)

Hoe werkt een conductivity detector?

De detector meet de elektrische geleiding van een vloeistof tussen twee elektroden. Wanneer monstercomponenten met geleidende eigenschappen langskomen, verandert de geleidbaarheid van de mobiele fase, wat door de detector wordt geregistreerd.

Wat is nodig om de geleidbaarheid te meten van een conductivity detector?

Een geleidingscel met twee elektroden en een versterker (amplifier).

Wat is een quadrupool MS (QMS)?

Een type massaspectrometer waarbij vier staven (de quadrupool) ionen filteren op basis van hun massa/lading-verhouding (m/z).

Met welke technieken kan MS gecombineerd worden?

Met GC (gaschromatografie) en LC (vloeistofchromatografie).

Welke methode wordt vaak gebruikt bij kwantitatieve MS-analyse?

De externe standaard methode.

Hoe werkt een MS detector?

De detector gebruikt 4 metalen cilinders (quadrupool) om ionen te filteren op basis van hun massa/lading-verhouding (m/z). Door het aanpassen van een oscillerend elektrisch veld tussen de cilinders worden alleen ionen met een specifieke m/z-stabiliteit doorgelaten naar de detector.

Hoe wordt bepaald welke ionen worden doorgelaten naar de MS detector?

Door het aanpassen van het elektrisch veld tussen de cilinders kan het gewenste m/z-bereik worden ingesteld. Alleen ionen met die m/z-waarde bereiken de detector; andere worden afgeweken.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

chromatografie

Bekijk samenvatting

Een unieke studie- en oefentool
Nooit meer iets twee keer studeren
Haal de cijfers waar je op hoopt
100% zeker alles onthouden

Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.

Studiemateriaal generieke omslagafbeelding