Startpagina / Samenvattingen / chromatografie / polair-phase-apolaire

Vloeistofchromatografie - kolom

Q: Wat zijn de mobiele en stationaire fase bij vloeistofchromatografie (LC)?

De mobiele fase (ook wel eluens ) is een vloeistof die door het systeem stroomt en de stoffen meeneemt. De stationaire fase is een vloeistof die gecoat is op een vaste drager (bijvoorbeeld silica-deeltjes), waarop de scheiding van stoffen plaatsvindt.

Q: Wat is het nadeel van het gebruik van kleine deeltjes in HPLC, volgens de weergegeven formule?

Volgens de formule leidt een kleinere deeltjesdiameter (dₚ) tot een veel hogere druk (ΔP) , omdat dₚ² in de noemer staat . Hoewel kleine deeltjes zorgen voor betere scheiding , heb je daardoor krachtigere pompen en sterkere kolommen nodig.

Q: Waarom heeft GC een lagere schotelhoogte (H) dan HPLC bij hogere flowsnelheden?

GC gebruikt een capillaire kolom , terwijl HPLC een gepaste kolom gebruikt. Daarnaast is de diffusie in gas (GC) veel sneller dan in vloeistof (HPLC). Hierdoor kunnen componenten in GC zich sneller verdelen over de stationaire fase, wat leidt tot lagere H-waarden (betere efficiëntie) bij hogere flowsnelheden.

Q: Wat is het verschil tussen NP (Normal Phase) en RP (Reversed Phase) chromatografie?

NP (Normal Phase): Stationaire fase is polair (bijv. –OH, –NH₂). Mobiele fase is apolair . Polaire stoffen elueren later , doordat ze sterker hechten aan de stationaire fase. RP (Reversed Phase): Stationaire fase is apolair (bijv. C8, C18). Mobiele fase is polair (meestal water met methanol/acetonitril). Apolaire stoffen elueren later , doordat ze langer hechten aan de apolaire fase.

Q: Hoe worden functionele zijgroepen aan de stationaire fase van een HPLC-kolom gebonden?

De stationaire fase bestaat uit silicagel met vrije silanolgroepen (–Si–OH) , die ontstaan door verhitting (150–200 °C) . Deze silanolgroepen reageren met organochloorsiloxanen , waarbij een functionele groep (R) aan het oppervlak wordt gebonden. Hierdoor ontstaan aangepaste kolommen (bijv. C18, fenyl) met specifieke polair/apolair eigenschappen . De reactie geeft HCl als bijproduct.

Q: Hoe werkt Normal Phase chromatografie en wat gebeurt er bij verhoging van de polariteit van het eluens?

Bij Normal Phase chromatografie is de stationaire fase polair (bijv. cyano, diol, amino) en het eluens apolair . Als je de polariteit van het eluens verhoogt , lossen polaire stoffen (zoals A) beter op in de mobiele fase en elueren daardoor sneller (lagere tR) . → Verhoogde eluenspolariteit = kortere retentietijd voor polaire componenten .

Q: Hoe werkt Reversed Phase chromatografie en wat gebeurt er als je de polariteit van het eluens verlaagt?

Bij Reversed Phase chromatografie is de stationaire fase apolair (bijv. C-keten zoals C18) en het eluens polair (zoals water met methanol of acetonitril). Als je de polariteit van het eluens verlaagt , lossen minder polaire stoffen (zoals C) beter op in de mobiele fase en elueren daardoor sneller (lagere tR) . → Lagere eluenspolariteit = kortere retentietijd voor apolaire componenten .

Q: Wat kan je zeggen over de restgroepen van de organosiloxanen

Hoe apolarer de groep, hoe geschikter voor RPLC (apolaire kolom). Hoe polairder , hoe beter voor LSC (polaire kolom).

Q: Wat is het effect van een langere koolstofketen (zoals methyl, octyl, octadecyl) op de retentietijd (tR) in chromatografie?

Een langere C-keten in de stationaire fase (bijv. octadecyl i.p.v. methyl) zorgt voor: Grotere capaciteit (meer interactieoppervlak) Sterkere apolaire interacties met analyten Langere retentietijd (tR) , vooral voor apolaire stoffen zoals tolueen → Dus: hoe langer de C-keten, hoe sterker de retentie van apolaire stoffen.

Q: Wat zijn belangrijke beperkingen van silica-gebaseerde kolommen in HPLC?

pH-bereik : silica-kolommen zijn alleen stabiel tussen pH 2–8 (liefst 3–7) Te lage pH (<2) : de gebonden stationaire fase (bijv. C18) kan loslaten Te hoge pH (>8) : de silica zelf kan oplossen Kolom moet ook hoge druk aankunnen i.v.m. kleine deeltjes

14 belangrijke vragen over Vloeistofchromatografie - kolom

Wat zijn de mobiele en stationaire fase bij vloeistofchromatografie (LC)?

De mobiele fase (ook wel eluens) is een vloeistof die door het systeem stroomt en de stoffen meeneemt.
De stationaire fase is een vloeistof die gecoat is op een vaste drager (bijvoorbeeld silica-deeltjes), waarop de scheiding van stoffen plaatsvindt.

Wat is het nadeel van het gebruik van kleine deeltjes in HPLC, volgens de weergegeven formule?

Volgens de formule leidt een kleinere deeltjesdiameter (dₚ) tot een veel hogere druk (ΔP), omdat dₚ² in de noemer staat.
Hoewel kleine deeltjes zorgen voor betere scheiding, heb je daardoor krachtigere pompen en sterkere kolommen nodig.

Waarom heeft GC een lagere schotelhoogte (H) dan HPLC bij hogere flowsnelheden?

GC gebruikt een capillaire kolom, terwijl HPLC een gepaste kolom gebruikt.
Daarnaast is de diffusie in gas (GC) veel sneller dan in vloeistof (HPLC). Hierdoor kunnen componenten in GC zich sneller verdelen over de stationaire fase, wat leidt tot lagere H-waarden (betere efficiëntie) bij hogere flowsnelheden.

Wat is het verschil tussen NP (Normal Phase) en RP (Reversed Phase) chromatografie?

NP (Normal Phase):

Stationaire fase is polair (bijv. –OH, –NH₂).
Mobiele fase is apolair.
Polaire stoffen elueren later, doordat ze sterker hechten aan de stationaire fase.

RP (Reversed Phase):

Stationaire fase is apolair (bijv. C8, C18).
Mobiele fase is polair (meestal water met methanol/acetonitril).
Apolaire stoffen elueren later, doordat ze langer hechten aan de apolaire fase.

Hoe worden functionele zijgroepen aan de stationaire fase van een HPLC-kolom gebonden?

De stationaire fase bestaat uit silicagel met vrije silanolgroepen (–Si–OH), die ontstaan door verhitting (150–200 °C).
Deze silanolgroepen reageren met organochloorsiloxanen, waarbij een functionele groep (R) aan het oppervlak wordt gebonden.
Hierdoor ontstaan aangepaste kolommen (bijv. C18, fenyl) met specifieke polair/apolair eigenschappen. De reactie geeft HCl als bijproduct.

Hoe werkt Normal Phase chromatografie en wat gebeurt er bij verhoging van de polariteit van het eluens?

Bij Normal Phase chromatografie is de stationaire fase polair (bijv. cyano, diol, amino) en het eluens apolair.
Als je de polariteit van het eluens verhoogt, lossen polaire stoffen (zoals A) beter op in de mobiele fase en elueren daardoor sneller (lagere tR).
→ Verhoogde eluenspolariteit = kortere retentietijd voor polaire componenten.

Hoe werkt Reversed Phase chromatografie en wat gebeurt er als je de polariteit van het eluens verlaagt?

Bij Reversed Phase chromatografie is de stationaire fase apolair (bijv. C-keten zoals C18) en het eluens polair (zoals water met methanol of acetonitril).
Als je de polariteit van het eluens verlaagt, lossen minder polaire stoffen (zoals C) beter op in de mobiele fase en elueren daardoor sneller (lagere tR).
→ Lagere eluenspolariteit = kortere retentietijd voor apolaire componenten.

Wat kan je zeggen over de restgroepen van de organosiloxanen

Hoe apolarer de groep, hoe geschikter voor RPLC (apolaire kolom).
Hoe polairder, hoe beter voor LSC (polaire kolom).

Wat is het effect van een langere koolstofketen (zoals methyl, octyl, octadecyl) op de retentietijd (tR) in chromatografie?

Een langere C-keten in de stationaire fase (bijv. octadecyl i.p.v. methyl) zorgt voor:

Grotere capaciteit (meer interactieoppervlak)
Sterkere apolaire interacties met analyten
Langere retentietijd (tR), vooral voor apolaire stoffen zoals tolueen
→ Dus: hoe langer de C-keten, hoe sterker de retentie van apolaire stoffen.

Wat zijn belangrijke beperkingen van silica-gebaseerde kolommen in HPLC?

pH-bereik: silica-kolommen zijn alleen stabiel tussen pH 2–8 (liefst 3–7)

Te lage pH (<2): de gebonden stationaire fase (bijv. C18) kan loslaten

Te hoge pH (>8): de silica zelf kan oplossen

Kolom moet ook hoge druk aankunnen i.v.m. kleine deeltjes

Wat is endcapping en waarom is het nodig bij silica-kolommen in HPLC?

Slechts ±60% van de silica-oppervlakte wordt gemodificeerd met functionele groepen (zoals C18)
Hierdoor blijven er vrije silanolgroepen (–Si–OH) over
Die vrije groepen kunnen water of polaire stoffen binden → dit veroorzaakt staartvorming (asymmetrische pieken)
Endcapping = nabehandeling waarbij vrije silanolgroepen worden afgedekt met kleine groepen zoals trimethylsilyl
Alternatief: triethylamine toevoegen aan mobiele fase om silanolinteracties te blokkeren

Hoe kies je een geschikte kolom voor een analyte met een molecuulmassa < 2000 g/mol?

Kijk eerst of de stof oplosbaar is in water of in organische oplosmiddelen

In water oplosbaar?

Ionisch → gebruik ionenwisselingschromatografie
Niet-ionisch/ion-paired → gebruik normale fase met cyano of amino

In organisch oplosmiddel oplosbaar?

Niet-polair of licht-polair (bijv. in hexaan, toluen) → reversed-phase kolom (C18, C8, fenyl, cyano)
Matig polair (bijv. in CHCl₃ of CH₃OH) → kies tussen:
- Adsorptiechromatografie op silica
- Normale-fasechromatografie met cyano/amino/diol
Sterk polair (bijv. alcoholen/acetonitril) → normale fase met cyano of amino

Hoe pak je een HPLC-analyse aan bij een onbekend monster?

Eerst: bepaal de polariteit van het monster
Kies tussen LSC of RP-HPLC (meestal 90% kans op RP-HPLC)
Begin met RP-HPLC met een C8-kolom
Voer 3 metingen uit met verschillende zuivere eluens (mobiele fase) die sterk verschillen in polariteit
Kies de mobiele fase waarbij de meeste pieken in de eerste 5 ml eluaat zichtbaar zijn → bijmengen met water
Werkt dat niet? Probeer dan C18-kolom
Als ook dat niet werkt: overstappen naar gradiëntelutie

Laat weten als je hier een stappenplan van wilt maken!

Welke analysetypes kun je uitvoeren met RPHPLC en LSC?

RPHPLC (Reversed Phase) wordt gebruikt voor het scheiden van matig polaire en polaire verbindingen
- Stof moet een apolair deel bevatten, anders bindt het niet aan de stationaire fase
- Bijvoorbeeld:
  - C18-kolom voor apolaire stoffen
  - C8-kolom voor mengsels met zowel apolaire als polaire componenten
LSC (Liquid Solid Chromatography) wordt gebruikt voor het scheiden van weinig polaire stoffen
- Hierbij gebruik je een matig polaire mobiele fase
Zeer polaire kolommen worden gebruikt voor het scheiden van suikers en alcoholen
- Bijvoorbeeld in bierproductie

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

chromatografie

Bekijk samenvatting

Een unieke studie- en oefentool
Nooit meer iets twee keer studeren
Haal de cijfers waar je op hoopt
100% zeker alles onthouden

Onthoud sneller, leer beter. Wetenschappelijk bewezen.

Studiemateriaal generieke omslagafbeelding

Vloeistofchromatografie - kolom

14 belangrijke vragen over Vloeistofchromatografie - kolom

Wat zijn de mobiele en stationaire fase bij vloeistofchromatografie (LC)?

Wat is het nadeel van het gebruik van kleine deeltjes in HPLC, volgens de weergegeven formule?

Waarom heeft GC een lagere schotelhoogte (H) dan HPLC bij hogere flowsnelheden?

Wat is het verschil tussen NP (Normal Phase) en RP (Reversed Phase) chromatografie?

Hoe worden functionele zijgroepen aan de stationaire fase van een HPLC-kolom gebonden?

Hoe werkt Normal Phase chromatografie en wat gebeurt er bij verhoging van de polariteit van het eluens?

Hoe werkt Reversed Phase chromatografie en wat gebeurt er als je de polariteit van het eluens verlaagt?

Wat kan je zeggen over de restgroepen van de organosiloxanen

Wat is het effect van een langere koolstofketen (zoals methyl, octyl, octadecyl) op de retentietijd (tR) in chromatografie?

Wat zijn belangrijke beperkingen van silica-gebaseerde kolommen in HPLC?

Wat is endcapping en waarom is het nodig bij silica-kolommen in HPLC?

Hoe kies je een geschikte kolom voor een analyte met een molecuulmassa < 2000 g/mol?

Hoe pak je een HPLC-analyse aan bij een onbekend monster?

Welke analysetypes kun je uitvoeren met RPHPLC en LSC?

Samenvattingen die gerelateerd zijn aan Vloeistofchromatografie - detecteren

chromatografie

Diabetes: epidemiologie; pathogenese type 1 …

Biotechnologie

biotech

immuno

speciele bacteriologie

hematologie

klinische chemie

afp sim

virologie 2021

immunologie OP2

AFP