Lees hier de samenvatting en de meest belangrijke oefenvragen van Moleculaire Celbiologie & Immunologie praktijk

• 1 Onderdeel 1: Transformaties

• Op welke drie manieren kan een plasmide in een gist gastheercel worden getransformeerd?

  1. Elektroporatie
     
  2. gene gun 
  3. chemische transformatie 

• Waarom wordt de transformatie van YFP-AQP0 uitgevoerd?

  Dit is een positieve controle op de werking van YFP gebonden aan AQP0. Dit is dus een positieve controle op fluoriscentie.

• Waarom wordt de transformatie #2 YFPn-AQP0 met YFPc-CaM uitgevoerd?

  Met deze transformatie kan worden getest of er een interactie plaats vindt tussen AQP0 en CaM. Op het moment dat er fluorescentie waarneembaar is zijn YFPn en YPFc bij elkaar gekomen en aan elkaar gekoppeld.

• Waarom wordt transformatie #3 YFPn-AQP0delta en YFPc-CaM uitgevoerd?

  Deze wordt uitgevoerd om te testen welk effect een deletie heeft in het AQP0 gen op de interactie tussen AQP0 en CaM.

• Waarom wordt transformatie #4 YFPn-AQP0 uitgevoerd?

  Dit is ook een controle transformatie. Hiermee wordt gecontroleerd of het YFPn gekoppeld an AQP0 deel niet opzicht zelf al fluoriscentie uitstraat.

• Waarom wordt transformatie #5 p423GPD (empty) uitgevoerd?

  Dit is de negatieve controle op fluoriscentie.

• Waarom wordt transformatie #6 YFPc-CaM uitgevoerd?

  Dit is ook een controle transformatie en hiermee wordt gecontroleerd of het YFPc deel gekoppeld aan CaM opzicht zelf niet al fluoriscentie uitstraalt.

• Waarom is het belangrijk om ook te controleren op levensvatbaarheid van de competente cellen?

  Dit is belangrijk omdat je op deze manier kan controleren of de cellen überhaupt wel groeien. Wanneer er bijvoorbeeld negatieve resultaten uit de transformatie zouden komen en er is ook niks op deze plaat gegroeid kan het wellicht liggen aan de levensvatbaarheid van de competente cellen.

• Waarom wordt er bij de negatieve controle competente cellen uitgeplaat op een YNB medium waar niks aan is toegevoegd.

  Hier verwacht je geen groei omdat er een giststam wordt gebruikt die histidine en uracil in het medium nodig heeft. Op deze manier controleer je of dat ook daadwerkelijk zo is of dat de gisten niet alsnog groeien.

• 1.1 Transformatie protocol

  Dit is een preview. Er zijn 2 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1.1
  Laat hier meer flashcards zien

• Uit welke componenten bestaat de transformatie mix?

  • PolyEthyleenGlycol (PEG)
    
  • LithiumAcetaat (LiOAc) 
  • Gedentatureerd carrier DNA 
  • Buffer