Startpagina / Samenvattingen / Class notes - moleculaire mechanisme van kanker / cellen-cel-cre

Muis genetica/ developmentele en kanker biologie

Q: Cre reporter allelen?

Wortd vaak gezet in het Rosa26 locus , functie is nog niet bekend --> hier wordt het construct ingebouwd. CAGG = een algemene promoter activiteit die in elke cel aan staat. lacZ zorgt voor blauwe kleuirng van de cel door dat Cre de NeoR-polyA er uitkn ipt, waardoor lacZ actief wordt

Q: Wat doet een (LGR5 -) DTR ?

Dyphteria toxin receptor als je dan dyptheria geeft dan gaan alle LGR5 gen (dit kan elk soort gen zijn) bevattende cellen dood binnen 12 uur . hiermee ka je de celfunctie te weten komen vaak zit er aan DTR ook een GFP om die cellen groen te maken, zodat je weet dat de knock-in goed is gelukt.

6 belangrijke vragen over Muis genetica/ developmentele en kanker biologie

Wat geeft Tcf4-/- en Tcf4 fl/fl

Het vormen van TCF4 -/- is een knockout, dus beide allelen worden uitgeschaklet door bv. Crisper Cas

Doe je met homologous recombinatie arms en met een stuk DNA er tussen om het gen uit te schakelijken.

Het vormen van Tcf4 fl/fl zorgt voor een knockout die je zelf in de tijd en weefselspecifiek kan induceren emt een soort Cre met loxp sites

Is een flox/flox
De knockout wordt pas gemaakt als bv. cre wordt toegevoegd.

Hoe maak je een conditionele knock-out?

Gedaan met insertie van loxP sites

De driehoekjes die dezelfde kant opstaan, daar tussen wordt het DNA er uit geknipt.
Driehoekjes naar elkaar toe dan knipt die en plakt die het andersom in, dus een inversie.

Cre enzym deletes DNA tussen de loxp sites
De muis kan normaal ontwikkelen tot dat cre wordt geïnduceerd, dan pas wordt het DNA aangepast.

Zo krijg je wel een knock-out -/-

je kan orgaan specifiek cre induceren
Je kan cre induceren in de tijd
FRT is z'n zelfde site als loxP

Cre reporter allelen?

Wortd vaak gezet in het Rosa26 locus, functie is nog niet bekend --> hier wordt het construct ingebouwd.
CAGG = een algemene promoter activiteit die in elke cel aan staat.
lacZ zorgt voor blauwe kleuirng van de cel door dat Cre de NeoR-polyA er uitknipt, waardoor lacZ actief wordt

Neutral drift dynmaics in de crypte?

De stamcellen delen elke dag en dat past niet waardoor er een paar weg moeten, ze delen symmetrisch. De klonen kunnen groter en kleiner worden door dat de cellen elkaar er uit kunnen gooien als er te weinig plak is. --> Neutral drift dynmaics.

Wat doet een (LGR5 -) DTR ?

Dyphteria toxin receptor als je dan dyptheria geeft dan gaan alle LGR5 gen (dit kan elk soort gen zijn) bevattende cellen dood binnen 12 uur.
hiermee ka je de celfunctie te weten komen
vaak zit er aan DTR ook een GFP om die cellen groen te maken, zodat je weet dat de knock-in goed is gelukt.

Waarom zijn paneth cellen nodig voor het goed ontwikkelen vaan een organoid?

Als je een stamcel en een paneth cel neemt om een organoid te maken dan heb je goede groei. De paneth cel zorgt voor een boost en aanmaak van wnt voor de stamcel. --> hiermee krijg je een signaleringsgradiënt.
dit heb je niet als je exogeen Wnt geeft aan de cellen --> dan worden en blijven het altijd stamcellen --> geen differentatie.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

moleculaire mechanisme van kanker

Bekijk samenvatting