Startpagina / Samenvattingen / Class notes - moleculaire mechanisme van kanker / mutatie-eiwit-knock-out

Muis genetica - constructen

Q: Welk genconstruct zorgt voor een induceerbaar oncogen?

Ze kunnen het allebei Die van Jack kan je de mutatie aan zetten in een weefsel en die blijft onder zijn eigen promotor. De mutatie in KRAS geeft geen tumoren, maar induceert wel een mutatie als Cre wordt toegvoegd. Barbara : complet cDNA is al het mRNA zonder splicing er in gezet met de mutatie. Als cre wortd toegevoegt wordt er een mutatie geïnduceerd. Nadeel is gene RNA splicing en voordeel is iRES met GFP. Alles wat groen is heeft goede ingebouwde construct.

Q: Wat laat KI5 en KI5a zien?

KI5 : maakt RFP maar het eigen ge n is kappot want je mist exon 1, dus je maakt een knock-in maar je maakt een knock-out van het gen. KI5a: hier behoud je het gen maar je hebt na RFP een poly a signaal dus heb je ook geen functionele afschrijving van het gen. Je maakt hierook een soort knock-out altijd het meest van het gen behouden, dus KI5a is het best.

Q: Hoe maak je een induceerbaar eiwitafbraak construct?

KI6 : een degron wordt herkent als er een stof wordt toegevoegd en dan wordt E3 ligase herkent die de eiwit herkent en afbreekt. Hier maak je ook een knock-out Degron is essentieel dat het aan het eiwit zit met een fusie RFP zegt iets over waar je eiwit aanwezig is en of de degron fusie gelukt is Eiwit kan weer terug komen als je de stof weghaalt Ons project

Q: Hoe maak je een gene trap? Wat laat KI7 en IK7a zien?

KI7 : iRES lacZ staat in een intron Het mRNA houdt op na de lacZ dus je maakt een knock-out en je ziet de cellen blauw worden die het hebben. Intronen zijn heel groot KI7a : de splicsites staan in de verkeerde volgorde. Als loxP sites omdraaien door cre dan heb je wel weer de zelfde situatie als Ki7 en krijg je gene trapping, de cel wordt blauw en het gen inactief.

5 belangrijke vragen over Muis genetica - constructen

Welk genconstruct zorgt voor een induceerbaar oncogen?

Ze kunnen het allebei
Die van Jack kan je de mutatie aan zetten in een weefsel en die blijft onder zijn eigen promotor. De mutatie in KRAS geeft geen tumoren, maar induceert wel een mutatie als Cre wordt toegvoegd.
Barbara: complet cDNA is al het mRNA zonder splicing er in gezet met de mutatie. Als cre wortd toegevoegt wordt er een mutatie geïnduceerd. Nadeel is gene RNA splicing en voordeel is iRES met GFP. Alles wat groen is heeft goede ingebouwde construct.

Wat laat KI5 en KI5a zien?

KI5: maakt RFP maar het eigen gen is kappot want je mist exon 1, dus je maakt een knock-in maar je maakt een knock-out van het gen.
KI5a: hier behoud je het gen maar je hebt na RFP een poly a signaal dus heb je ook geen functionele afschrijving van het gen. Je maakt hierook een soort knock-out

altijd het meest van het gen behouden, dus KI5a is het best.

Hoe maak je een induceerbaar eiwitafbraak construct?

KI6: een degron wordt herkent als er een stof wordt toegevoegd en dan wordt E3 ligase herkent die de eiwit herkent en afbreekt. Hier maak je ook een knock-out

Degron is essentieel dat het aan het eiwit zit met een fusie
RFP zegt iets over waar je eiwit aanwezig is en of de degron fusie gelukt is
Eiwit kan weer terug komen als je de stof weghaalt
Ons project

Wat laat KI6b en KI6c zien en wat kun je er mee?

Isolatie op basis van antibitotica puromicine of Neo

de cellen kan je hierdoor selecteren.

Als je ook nog een allele met een andere antibitotica dan kan je een homzygoot te maken
De puro en neo hebben hun eigen promoter

PGK duidt er op dat ze eigen promoter hebben

RFP is een interne controle of het eiwit aanwezig is.
Een algemeen eiwit dan 6 en 6a
En celtype specifiek dan 6b en 6c

Hoe maak je een gene trap? Wat laat KI7 en IK7a zien?

KI7: iRES lacZ staat in een intron

Het mRNA houdt op na de lacZ dus je maakt een knock-out en je ziet de cellen blauw worden die het hebben.
Intronen zijn heel groot

KI7a: de splicsites staan in de verkeerde volgorde. Als loxP sites omdraaien door cre dan heb je wel weer de zelfde situatie als Ki7 en krijg je gene trapping, de cel wordt blauw en het gen inactief.

De vragen op deze pagina komen uit de samenvatting van het volgende studiemateriaal:

moleculaire mechanisme van kanker

Bekijk samenvatting