Samenvatting: Advanced Labtools

Lees hier de samenvatting en de meest belangrijke oefenvragen van Advanced labtools

• 1 Les 1 flashcards Deel 1

  Dit is een preview. Er zijn 3 andere flashcards beschikbaar voor hoofdstuk 1
  Laat hier meer flashcards zien

• Wat valt onder biologisch start materiaal?

  • Dierlijk weefsel
    
  • Plant materials
  • Human biopsies or blood samples
  • cultures cells 
  • Etc.

• Wat is de algemene strategie voor eiwit zuivering en analyse?

  1. Biologisch start materiaal
     
  2. Pre-treatment: homogenisatie, lysis, fractionering 
  3. Protein purification: Salting out, kolom chromatografie, dialysis 
  4. Analyse: kwantificatie, activiteit bepaling 

• Wat voor analysen moeten bij elke stap uitgevoerd worden en waarom?

  • Totaal hoeveelheid eiwit (BCA)
    
  • SDS_PAGE / Western Blot
  • ELISA
  • (enzyme) activity assay

  
  
  Om bij te houden wat de zuiverheid/yield verhouding is in de loop van het proces, de stappen van het proces te controleren op fouten en om het proces te optimaliseren

• Wanneer kies je voor yield > zuiverheid en wanneer zuiverheid > yield?

  • Yield > zuiverheid: Start materiaal is erg duur, moeilijk te verkrijgen of gelimiteerd
    
  • Yield < zuiveerheid: Start materiaal is erg goedkoop, makkelijk te verkrijgen

• Wat is de belangrijkste factor die bepaald wat de zuiverheid van je eindproduct moet zijn?

  • Waar het voor gebruikt gaat worden. Medisch gebruik of industrieel gebruik? Zuiverheid minimum verschilt 
    

• Wat is de belangrijkster factor die bepaald de zuiverheid van je eindproduct?

  • Waar het voor gebruikt gaat worden. Medisch gebruik of industrieel gebruik? Zuiverheid minimum verschilt  
    

• Wat zijn de technieken voor het prepareren van start materiaal?

  • Mechanisch methoden (goed koelen 4 graden celcius om denaturatie door warmte afgifte te minimaliseren)
  • Mixers en of blenders
  • Rotos-stators
  • Glass beads
  • Niet-mechanische methoden
  • Osmotic shock (hypertonic-hypotonic change)
  • Freeze-thaw cycles
  • Enzymatic breakdown of cell walls

• Wat zijn een aantal redenen voor loss of activity van een eiwit?

  • Denaturatie
    
  • verlies van cellulaire inhoud
  • pH veranderingen
  • inhibitie
  • verlies van co-factoren / co enzymen
  • verlies van post-translationele modificaties
  • oxidatie
  • degradatie / proteolysis
  • contaminatie (bacteria, fungi)

• Wat zijn een aantal redenen voor loss of activity van een eiwit?  Noem er drie

  • Denaturatie
    
  • verlies van cellulaire inhoud
  • pH veranderingen
  • inhibitie
  • verlies van co-factoren / co enzymen
  • verlies van post-translationele modificaties
  • oxidatie
  • degradatie / proteolysis
  • contaminatie (bacteria, fungi)

• Benoem Componenten van buffers ( en andere oplossingen) in eiwit isolatie (Heel belangrijk in de toekomst!)

  Benoem er minimaal 3 volledig (dus met voorbeelden)